目錄
上篇 基本實(shí)驗(yàn)
第一章 顯微鏡的構(gòu)造和使用 1
實(shí)驗(yàn)1-1 普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造、使用方法及細(xì)胞基本形態(tài)結(jié)構(gòu)的觀察 1
實(shí)驗(yàn)1-2 倒置相差顯微鏡的構(gòu)造與使用 5
實(shí)驗(yàn)1-3 顯微鏡測(cè)微尺的使用 8
第二章 流式細(xì)胞儀技術(shù)與應(yīng)用 14
實(shí)驗(yàn)2-1 流式細(xì)胞儀結(jié)構(gòu)原理及應(yīng)用 14
實(shí)驗(yàn)2-2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期 18
實(shí)驗(yàn)2-3 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡 19
實(shí)驗(yàn)2-4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞中抗原——流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群 21
第三章 細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的觀察與分離 24
實(shí)驗(yàn)3-1 細(xì)胞器結(jié)構(gòu)的觀察 24
實(shí)驗(yàn)3-2 細(xì)胞器分級(jí)分離 31
第四章 細(xì)胞化學(xué)方法和細(xì)胞化學(xué)成分顯示 34
實(shí)驗(yàn)4-1 細(xì)胞化學(xué)基本理論 34
實(shí)驗(yàn)4-2 細(xì)胞中骨架蛋白的顯示與細(xì)胞形態(tài)的觀察 37
實(shí)驗(yàn)4-3 Feulgen法顯示脫氧核糖核酸 39
實(shí)驗(yàn)4-4 甲基綠-派洛寧顯示核酸 41
實(shí)驗(yàn)4-5 蘇木素-伊紅染色顯示細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì) 42
第五章 酶細(xì)胞化學(xué) 45
實(shí)驗(yàn)5-1 酶細(xì)胞化學(xué)的基本原理 45
實(shí)驗(yàn)5-2 堿性磷酸酶顯示及用途 47
實(shí)驗(yàn)5-3 聯(lián)苯胺法顯示過(guò)氧化物酶及應(yīng)用 49
實(shí)驗(yàn)5-4 詹納斯綠顯示活體細(xì)胞線粒體 50
實(shí)驗(yàn)5-5 利用琥珀酸脫氫酶活性進(jìn)行MTT檢測(cè)細(xì)胞相對(duì)存活率 51
實(shí)驗(yàn)5-6 CCK8檢測(cè)技術(shù) 53
第六章 免疫化學(xué)技術(shù) 56
實(shí)驗(yàn)6-1 免疫酶細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中P65蛋白的表達(dá) 56
實(shí)驗(yàn)6-2 免疫熒光染色顯示髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中HES1蛋白的分布 58
實(shí)驗(yàn)6-3 免疫組織化學(xué)法檢測(cè)HES1在胃癌組織中的表達(dá)與分布 60
第七章 細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù) 64
實(shí)驗(yàn)7-1 人類性染色質(zhì)標(biāo)本的制備與觀察 64
實(shí)驗(yàn)7-2 人外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)與染色體制備 66
實(shí)驗(yàn)7-3 小鼠骨髓細(xì)胞染色體標(biāo)本的制備與觀察 69
實(shí)驗(yàn)7-4 染色體G顯帶技術(shù) 70
實(shí)驗(yàn)7-5 核型分析 74
第八章 細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù) 77
實(shí)驗(yàn)8-1 細(xì)胞培養(yǎng)的基本原理與技術(shù) 77
實(shí)驗(yàn)8-2 細(xì)胞的原代培養(yǎng) 84
實(shí)驗(yàn)8-3 傳代細(xì)胞培養(yǎng) 85
實(shí)驗(yàn)8-4 培養(yǎng)細(xì)胞的形態(tài)觀察和計(jì)數(shù) 87
實(shí)驗(yàn)8-5 細(xì)胞凍存、復(fù)蘇與運(yùn)輸 90
實(shí)驗(yàn)8-6 細(xì)胞克隆化培養(yǎng) 92
實(shí)驗(yàn)8-7 細(xì)胞三維培養(yǎng) 94
第九章 細(xì)胞行為學(xué) 99
實(shí)驗(yàn)9-1 細(xì)胞吞噬實(shí)驗(yàn) 99
實(shí)驗(yàn)9-2 細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn) 101
實(shí)驗(yàn)9-3 細(xì)胞周期 106
實(shí)驗(yàn)9-4 小鼠減數(shù)分裂 109
實(shí)驗(yàn)9-5 細(xì)胞周期特定時(shí)相細(xì)胞同步化方法 113
實(shí)驗(yàn)9-6 細(xì)胞運(yùn)動(dòng)的觀察 116
實(shí)驗(yàn)9-7 腫瘤細(xì)胞的遷移和侵襲試驗(yàn)——Transwell小室測(cè)定法 118
第十章 細(xì)胞衰老和凋亡的檢測(cè) 120
實(shí)驗(yàn)10-1 蘇木素-伊紅染色法顯示凋亡細(xì)胞 120
實(shí)驗(yàn)10-2 Giemsa染色法顯示凋亡細(xì)胞 122
實(shí)驗(yàn)10-3 凋亡細(xì)胞的原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL法） 123
實(shí)驗(yàn)10-4 細(xì)胞凋亡的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 125
實(shí)驗(yàn)10-5 細(xì)胞衰老的檢測(cè) 127
第十一章 蛋白質(zhì)的分離與測(cè)定 129
實(shí)驗(yàn)11-1 真核細(xì)胞蛋白質(zhì)提取 129
實(shí)驗(yàn)11-2 雙縮脲法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 131
實(shí)驗(yàn)11-3 福林-酚法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 132
實(shí)驗(yàn)11-4 考馬斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白質(zhì)濃度 134
實(shí)驗(yàn)11-5 蛋白質(zhì)印跡免疫分析（Western blot） 135
第十二章 核酸的分離、測(cè)定與分析 139
實(shí)驗(yàn)12-1 真核生物組織及細(xì)胞基因組DNA提取 139
實(shí)驗(yàn)12-2 組織及細(xì)胞中RNA的提取 140
實(shí)驗(yàn)12-3 DNA與RNA含量測(cè)定 142
實(shí)驗(yàn)12-4 聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)（PCR）體外擴(kuò)增DNA片段 143
實(shí)驗(yàn)12-5 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR） 145
實(shí)驗(yàn)12-6 實(shí)時(shí)定量PCR（Real time-PCR） 148
下篇 綜合實(shí)驗(yàn)
第十三章 小鼠胚胎干細(xì)胞培養(yǎng) 152
實(shí)驗(yàn)13-1 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的培養(yǎng) 152
實(shí)驗(yàn)13-2 飼養(yǎng)層細(xì)胞的制備 154
實(shí)驗(yàn)13-3 小鼠胚胎干細(xì)胞的分離及培養(yǎng) 155
第十四章 IL-6剝奪誘導(dǎo)小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系7TD1細(xì)胞凋亡、觀察及檢測(cè) 157
實(shí)驗(yàn)14-1 小鼠B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞系7TD1細(xì)胞復(fù)蘇與傳代培養(yǎng) 158
實(shí)驗(yàn)14-2 7TD1細(xì)胞的凋亡誘導(dǎo)（IL-6剝奪）及細(xì)胞收集 160
實(shí)驗(yàn)14-3 IL-6剝奪誘導(dǎo)7TD1細(xì)胞凋亡的形態(tài)特征觀察 161
實(shí)驗(yàn)14-4 IL-6剝奪誘導(dǎo)7TD1細(xì)胞凋亡的DNA提取及凋亡梯狀帶檢測(cè) 164
第十五章 觀察白藜蘆醇對(duì)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞分化、運(yùn)動(dòng)、凋亡的影響及相關(guān)基因的檢測(cè) 168
實(shí)驗(yàn)15-1 細(xì)胞的培養(yǎng)與傳代 168
實(shí)驗(yàn)15-2 白藜蘆醇處理前后細(xì)胞數(shù)量和形態(tài)的觀察以及免疫細(xì)胞化學(xué)染色 170
實(shí)驗(yàn)15-3 白藜蘆醇對(duì)髓母細(xì)胞瘤細(xì)胞遷移能力的影響 172
實(shí)驗(yàn)15-4 總RNA提取和分化相關(guān)基因突觸素（synaptophysin）的RT-PCR檢測(cè) 173
第十六章 小鼠表皮細(xì)胞原代培養(yǎng)及免疫熒光檢測(cè) 175
實(shí)驗(yàn)16-1 細(xì)胞原代培養(yǎng)（消化法） 175
實(shí)驗(yàn)16-2 細(xì)胞傳代 176
實(shí)驗(yàn)16-3 細(xì)胞的處理及免疫熒光法檢測(cè)E-cadherin 177
實(shí)驗(yàn)16-4 細(xì)胞的顯微攝影 179
第十七章 應(yīng)用基因重組技術(shù)在真核細(xì)胞中表達(dá)和檢測(cè)p53基因 182
實(shí)驗(yàn)17-1 目的基因p53 PCR擴(kuò)增及瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè) 183
實(shí)驗(yàn)17-2 目的基因p53片段純化回收與重組表達(dá)載體連接、轉(zhuǎn)化、篩選及重組質(zhì)粒提取 184
實(shí)驗(yàn)17-3 培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染目的基因表達(dá)載體 187
實(shí)驗(yàn)17-4 Western blot方法檢測(cè)外源目的基因p53表達(dá) 188
附錄 191
附錄一 試劑濃度的表示方法及其計(jì)算 191
附錄二 常用人工合成細(xì)胞培養(yǎng)基的種類、化學(xué)組成及適用細(xì)胞 193
附錄三 實(shí)驗(yàn)室常用細(xì)胞系（株） 196
附錄四 離心機(jī)轉(zhuǎn)數(shù)與離心力的換算表 199